高原环境下两种变异L型细菌的分离培养及鉴定

摘要

研究高原环境下L型变异细菌的变异量和抗原特征,以期为高原家畜L型细菌引发相关性疾病的临床诊治及有效预防奠定基础.选用藏系绵羊消化道食糜、藏系绵羊鼻液、西藏黄牛粪便为分离培养对象,采用特殊培养基分离培养、染色镜检、生化鉴定、血清型鉴定及PCR检测方法进行相关性研究.结果表明:L型大肠杆菌在高渗XLD培养基上呈现3种菌落形态,西藏黄牛粪便中变异菌比例为(40.69±56.67)％的菌落呈"油煎蛋样"型(L型),(52.73±36.68)％的菌落为颗粒型(G型),(6.57±6.65)％的菌落为菌丝型(F型);藏系绵羊消化道食糜变异菌比例中(64.41±85.66)％的菌落为L型,(28.81±14.34)％的菌落为G型,(6.78±0.00)％的菌落为F型.L型巴氏杆菌在高渗TSLN培养基上生长出2种菌落形态,占藏系绵羊鼻液中变异菌的(97.67±89.50)％为G型,(2.65±10.50)％的菌落为L型;藏系绵羊消化道食糜中(82.28±88.92)％的菌落为G型,(17.72±11.08)％的菌落为L型.挑取纯化后的正常菌进行革兰染色,观察到正常大肠杆菌两端呈粉红色、钝圆,革兰阴性短杆菌;正常巴氏杆菌两端钝圆,中央微凸起,单个或成对存在的革兰阴性短杆菌;挑取L型细菌"油煎蛋样"菌落,镜检可见L型大肠杆菌呈卵圆形、长杆状的革兰阴性菌;L型巴氏杆菌呈棒状、杆状的革兰阳性菌;用鞣酸-龙胆紫染色法染色,在高倍镜下观察,L型大肠杆菌、L型巴氏杆菌全菌染成蓝紫色,菌体长是正常菌的2～3倍,菌体呈椭圆、棒状、杆状等多种形状.L型细菌因细胞壁的缺失,生化鉴定与正常菌不同.正常大肠杆菌及正常巴氏杆菌生化鉴定符合《伯杰氏系统细菌学手册》中描述的生化特性,L型大肠杆菌除与正常大肠杆菌苯丙氨酸差异最大,其余生化鉴定差异不明显;L型巴氏杆菌与正常巴氏杆菌生化鉴定相比,表现为氧化酶试纸条呈蓝色,半固体琼脂穿刺、V-P、鸟氨酸脱羧酶肉汤、赖氨酸脱羧酶肉汤、山梨醇、蜜二糖及棉子糖生化鉴定为阳性;色氨酸脱羧酶肉汤生化鉴定为阴性.L型大肠杆菌血清凝集强度低于正常大肠杆菌,最强为2+,正常大肠杆菌最强为4+.L型大肠杆菌条带亮度从高到低依次为O15-R、O91-2R、O8-F,正常大肠杆菌电泳条带亮度从高到低依次O91-2R、O15-R、O21-F;L型巴氏杆菌条带亮度从高到低依次为A-F、B-F、F-F,正常巴氏杆菌电泳条带A-F、B-F、E-F.综上,L型细菌的抗原性发生改变.不同细菌的基因型适应高原环境的能力、在强紫外线下发生变异的概率、细胞壁中抗原性等发生变异的概率也均不同.