亚洲水牛热休克蛋白70的纯化、鉴定及表达动力学

摘要

本试验旨在研究亚洲水牛热休克蛋白70(heatshock protein70,HSP70)在淋巴细胞中的诱导、纯化和鉴定,同时还研究了HSP70在不同温度和时间段的诱导和表达动力学,用腺苷二磷酸-琼脂糖柱免疫亲和层析法纯化HSP70,并用鼠抗HSP70单克隆抗体经Western blotting法鉴定纯化的蛋白质,水牛淋巴细胞的HSP70分子质量约为68ku,低于牛脑HSP70的分子质量。用间接抑制酶联免疫吸附试验(ELISA)测定纯化的HSP70,纯化后获得大量HSP70。为测定温度和时间变化对HSP70诱导和表达模式的影响,把水牛淋巴细胞分为3个不同温度处理组,即38℃处理48h,之后继续在45℃条件下处理3h;②42℃条件下处理3h;③45℃条件下处理3h。3组细胞活力分别为68%、63%、51%;HSP70水平分别为58.30±4.37、42.59±9.04、21.95±6.79ng/百万细胞。结果表明,较高强度和较长时间的温度辐照造成水牛淋巴细胞HSP70的较高诱导以维持细胞自动调节,然而,淋巴细胞中HSP70的直接诱导依赖于热辐射的大小(应激水平)和热辐射的时间(应激时间)。