犬细小病毒VP2基因的原核表达及纯化

摘要

参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计了一对添加EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的引物,对CPV VP2基因进行PCR扩增,克隆至pGM-T载体,获得重组质粒pGM-T-VP2,将重组质粒亚克隆到表达载体pET-32a上,获得表达重组子pET-32a-VP2,经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定后,序列分析确定该重组子YM株VP2基因ORF正确,转化至E.coli Rosetta(DE3)中,获得了基因工程菌株E.coilRosetta(CVP2),并对重组菌进行了诱导表达,鉴定及纯化.结果表明纯化样品中含有87 kDa目的蛋白,Western blot检测发现该蛋白与犬细小病毒多克隆抗体发生反应,出现特异条带.E.coil Rosetta(CVP2)以包涵体形式表达出了CPV-YM株VP2,从而为进一步制备检测抗体效价的胶体金检测试剂盒的开发研究打下了良好的基础.