体外转录法制备小反刍兽疫病毒荧光定量RT-PCR检测标准阳性模板

摘要

针对小反刍兽疫病毒的F基因设计了一对荧光定量RT-PCR的引物和探针,在正向引物的5'端加上T7启动子后与反向引物扩增小反刍兽疫病毒株Nigeria 75/1细胞培养液RNA,切胶回收目的条带作为体外转录模板,体外转录后测RNA浓度以及OD值.线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性范围和特异性,当稀释度为4.9×1084.9×103拷贝/μL时,相关系数为0.999.该模板稳定性好,-80℃保存一个月后无显著变化.对起始浓度为4.9×106、4.9×105、4.9×104拷贝/μl的标准品分别检测10次,变异系数分别为1.09%,1.47%,1.34%,表明以此模板进行荧光定量PCR具有较好的重复性.