双链DNA直接测序法在环境诱变剂致突变分子机制研究中的应用Ⅰ.非突变质粒抗性基因片段的序列测定

摘要

本文报告了双链DNA直接测序法的建立,并以质粒pBR322为研究对象,选择其四环素抗性基因作为模板,合成了一个位于E.coRI位点逆时针方向紧邻处的寡核苷酸5′-GGCCCTTTCGTCTTC-3′作为引物。整个测序主要步骤包括:双链DNA碱变性、酶促合成反应和双脱氧末端终止法。结果显示,在非梯度胶的情况下,可以清晰可靠地读出200多个核苷酸顺序。