酸性神经磷脂酶在维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响

摘要

目的:探讨酸性神经磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASMase)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响。方法:常规体外培养人低分化胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为ASMase抑制剂地昔帕明(desipramine,DES)处理组(12.5μmol/L DES作用2 h),对照组(含2%胎牛血清的RPMI-1640培养液),VES+DES组(用12.5μmol/L DES抑制ASMase活性2 h后加20μg/mL VES)以及VES处理组(20μg/mL)。以ASMase活性试剂盒检测0、1.5、3、6 h时VES+DES组及VES处理组细胞中ASMase活性。MTT法分别检测12、24和48 h时各组细胞的增殖情况。再在处理细胞24 h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、Perk、p-Perk、Chop和Caspase-4的表达。结果:VES(20μg/mL)处理能够诱导细胞中ASMase活性增加,在3 h时细胞中ASMase活性达到最高,随后逐渐降低;VES+DES组细胞中ASMase活性始终维持在较低的水平。与对照组相比,DES组在各项检测中均无明显变化,而VES组与VES+DES组在处理细胞12、24与48 h后,细胞的增殖受到明显抑制(P均<0.05),并呈时间-效应趋势,且VES+DES组细胞不同时间点的相对增殖率均明显高于VES组(P均<0.05);细胞形态学显示20μg/mL VES处理细胞后,镜下死细胞明显增多,而VES+DES组死亡细胞数量较VES组减少;流式细胞术检测凋亡率显示VES处理组为39.21%±1.90%,明显高于空白对照组(3.91%±1.68%)与DES组(4.07%±1.39%)(P均<0.05),VES+DES组(19.47%±4.46%)较VES组明显降低(P<0.05);Western blot结果显示VES+DES组细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、p-Perk、Chop以及c-Caspase-4表达水平较单纯VES处理组降低(P均<0.05)。结论:ASMase参与VES通过内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的过程,起促进凋亡的作用。