地衣芽孢杆菌KD-1β-甘露聚糖酶定点突变提高酶活性及稳定性

摘要

对地衣芽孢杆菌β-甘露聚糖酶进行定向突变获得酶活性和稳定性提高的酶.应用PCR方法对Bacillus licheniformis KD-1β-甘露聚糖酶基因manBl进行基因克隆和定点突变,在枯草芽孢杆菌B.subtilis DB104中进行分泌表达,采用二硝基水杨酸(DNS)法进行酶活性测定.β-甘露聚糖酶ManBl及6个突变体最适pH 6.0,最适温度60°C,6个突变体比活力和pH 6.0-10.0之间的pH稳定性均高于野生型,突变体ManBl(T112R/K291E)比活力是野生型的2.6倍,为(9742±370.0)U/mg,Km值为2.67 mg/mL,70°C的半衰期为80 min;C-末端带有His标签后,ManBl和ManBl(T112R/K291E)的酶活性和热稳定性降低.β-甘露聚糖突变体ManBl(T112R/K291E)酶活性和稳定性高,适合在养殖业、食品加工和洗涤业等多种工业领域中应用.