胶孢炭疽菌细胞骨架荧光标记菌株的构建

摘要

胶孢炭疽菌寄主广泛,能够引起众多植物产生炭疽病害.细胞骨架的结构及重排、极性分布都对菌丝生长、形态发生及致病性有着非常重要的作用,但是目前关于其菌丝生长及致病过程中细胞内骨架分布及动态变化情况还知之甚少.为了构建胶孢炭疽菌微丝及微管骨架的荧光标记菌株,采用随机重组及同源重组原理,成功构建了Lifeact-EGFP、MBD-EGFP及CgTUB1-EGFP标记重组菌株.激光共聚焦显微镜观察表明Lifeact-EGFP能够清晰地标记胶孢炭疽菌微丝骨架、CgTUB1-EGFP能够清晰地标记微管骨架;而MBD-EGFP标记的菌株细胞中荧光强度较低.进一步对标记菌株的生长发育及致病力等生理表型进行分析,结果表明Lifeact-EGFP及CgTUB1-EGFP的标记并不影响胶孢炭疽菌正常的生理功能,这两种标记菌株能够用于后续实验,为进一步研究其细胞骨架动态变化及骨架结合蛋白的功能打下基础.