利用CRISPR/Cas9技术定点敲除烟草多酚氧化酶基因NtPPO1

摘要

植物多酚氧化酶具有多种重要的生理功能.为研究烟草中多酚氧化酶基因功能,从G enBank中挑选一个烟草多酚氧化酶基因(基因登录号为XM_016608009.1),命名为NtPPO1.NtPPO1编码序列经PCR扩增、克隆测序验证后,采用CRISPR/Cas9技术定点敲除NtPPO1,并利用实时荧光定量PCR检验基因敲除效果.研究表明烟草NtPPO1全长1 746bp,存在2种可变剪切方式.经测序与分析发现,T2突变体中的NtPPO1序列在靶位点处发生了1个、2个碱基的缺失突变与1个碱基的插入突变.实时荧光定量PCR检测结果显示,与对照相比,T2突变体中NtPPO1表达水平显著下降.烟株外观显示NtPPO1突变体与野生型对照之问无明显差异.