原核生物核糖核酸酶HII基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

摘要

核糖核酸酶HII(RNage HII)能有效降解RNA和DNA杂交链中的RNA链.为进一步研究其功能,利用大肠杆菌XLlblue为模板,相应的寡聚脱氧核苷酸为引物,PCR扩增大肠杆菌RNase HII(rnh 2)基因,并将目的基因连接到克隆载体pUC18上,经测序确认无误,分别亚克隆到能够进行IPTG诱导的表达栽体pTrcHisC和进行温度诱导的表达载体pBV220上.重组质粒转化到大肠杆菌DH5α细胞中获得高效表达.在载体pTrcHis和pBV220中目的蛋白RNase HII的表达量均超过菌体总蛋白的20%,且表达产物以稳定的包涵体形式存在.此项工作为以后目的蛋白的纯化提供了有利条件,并为研究其结构和功能奠定了基础.