玉米核糖体失活蛋白基因z108在烟草原生质体中的转化及其表达

摘要

利用与根癌农杆菌共培养的方法将玉米核糖体失活蛋白基因z108及其融合基因GUS导入烟草叶肉原生质体细胞.试验结果表明,烟草叶片在含有1.0%纤维素酶和0.5%离析酶的裂解液中,以0.5 M甘露醇、5 000.0 mg/L CaCl_2为渗透压调节剂,25℃保温12-14 h,可获得纯化的原生质体细胞;纯化的叶肉原生质体细胞与根癌农杆菌菌株pCam1301/ 91-108共培养30 min,经25 mg /L潮霉素筛选,转化率可达17.84%.转化体细胞经X-Gluc染色、PCR和RT-PCR检测证明玉米核糖体失活蛋白基因z108已整合到烟草原生质体细胞的核基因组中并获得表达.