蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化

摘要

蓝藻抗病毒蛋白-N( Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合.通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统.SUMO-L5-CVN在大肠杆菌BL21中呈可溶性表达；通过表达条件优化,以0.5 mmol/L IPTG在20℃诱导24h 是最佳的诱导表达条件；SUMO-L5-CVN表达量占菌体总蛋白的30％；经Ni-NTA亲和层析获得融合蛋白SUMO-L5-CVN,SUMO蛋白酶酶切,以及进一步从Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白L5-CVN蛋白纯度＞98％.结果表明,低浓度的L5-CVN与流感病毒表面糖蛋白gp120就有较高的亲和力.