人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)基因克隆

摘要

粒细胞集落刺激因子G-CSF是能使中性粒细胞系(lineage)造血细胞增殖、分化和活化的一种细胞因子。本课题首先用人胚胎cDNA为模板进行PCR,扩增出G-CSF全长的编码序列。再进行琼脂糖凝胶电泳,胶回收试剂盒回收目的片段,连接PMD18载体,然后转入DH5α感受态细胞中,在LB固体培养基和液体培养基中培养,从LB液体培养基中的菌液提取质粒,最后进行酶切和PCR鉴定。经过电泳检测确定通过PCR成功扩增了G-CSF全长645bp的编码序列,转入感受态细胞后,在固体和液体培养基中均生长良好,酶切和PCR鉴定结果明显。由PCR成功扩增了全长的G-CSF编码序列,经酶切和PCR鉴定,对结果进行分析得知成功完成对G-CSFcDNA的克隆。