粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑出血后TNF-α和IL-6mRNA表达的影响

摘要

目的:在大鼠脑出血模型中，以NF-κB的下游靶基TNF-α、IL-6mRNA的表达为主要指标，明确G-CSF能够抑制TNF-α、 IL-6的mRNA的表达，以期探寻脑出血发病的新机制和防治的策略。
　　方法:
　　1实验分组:实验一将45只大鼠随机分成3组，分别为Sham组（假手术组，给予开颅处理后未注血），ICH组（脑出血组），G-CSF治疗组(25μg/kg)。每组中按24h、3d和14d三个时间点均分。实验二将50只大鼠分为5组，分为Sham组，ICH组，小、中、大剂量组(25、50和75μg/kg)。
　　2大鼠脑出血模型的建立:采用自体动脉血脑内注射的方法，向大鼠尾状核内注射从大鼠尾动脉中提取的50μL自体不凝血用来构建制成大鼠脑出血模型，模拟人类脑出血，Sham组给予脑出血模型同样的开颅手术并缓慢刺入微量注射器而不注血。待大鼠清醒后进行行为学观察，评价其行为学的能力用Longa法评价。
　　3给药方式:G-CSF治疗组术后2h和14h经皮下分次注射G-CSF，Sham组和ICH组同样方法注入等量生理盐水。
　　4运用RT-PCR技术检测脑组织中TNF-α及IL-6mRNA的表达。
　　结果:
　　1对照Longa评分法评定大鼠的行为学变化，发现模型成功率为88.4％。
　　2术后各组在三个时间点上检测IL-6mRNA表达的变化:在1d时ICH组与Sham组相比IL-6的表达明显上升(P＜0.05)，治疗组与ICH组相比表达明显下降(P＜0.05);在3d时ICH组与Sham组相比IL-6的表达明显上升(P＜0.05)，治疗组与ICH组相比表达明显下降(P＜0.05);在14d时ICH组与Sham组相比IL-6的表达明显上升(P＜0.05)，治疗组与ICH组相比表达明显下降(P＜0.05)。
　　3术后各组在三个时间点上TNF-αmRNA表达的变化:在1d时ICH组与Sham组相比TNF-α的表达明显上升(P＜0.05)，治疗组与ICH组相比表达明显下降(P＜0.05);在3d时ICH组与Sham组相比TNF-α的表达明显上升(P＜0.05)，治疗组与ICH组相比表达明显下降(P＜0.05);在14d时ICH组与Sham组相比TNF-α的表达明显上升(P＜0.05)，治疗组与ICH组相比表达明显下降(P＜0.05)。
　　4术后3d在不同药物浓度实验组中IL-6mRNA表达的变化:术后3d时ICH组与Sham组相比，IL-6的表达量明显升高(P＜0.05);小剂量治疗组与ICH组相比，IL-6的表达稍有下降(P＜0.05);中剂量治疗组与低剂量治疗组相比，IL-6的表达下降较为明显(P＜0.05);大剂量治疗组与中剂量治疗组相比，IL-6的表达仍有降低(P＜0.05)。
　　5术后3d在不同药物浓度实验组中TNF-αmRNA表达的变化:术后3d时ICH组与Sham组相比，TNF-α的表达量明显升高(P＜0.05);小剂量治疗组与ICH组相比，TNF-α的表达稍有下降(P＜0.05);中剂量治疗组与低剂量治疗组相比，TNF-α的表达下降较为明显(P＜0.05);大剂量治疗组与中剂量治疗组相比，TNF-α的表达仍有降低(P＜0.05)。
　　结论:
　　1使用自体不凝血注入法及二次注血法制作大鼠脑出血模型简单易行并且成功率较高，可以很好地模拟人体脑出血时的病理生理变化。在研究脑出血中是一种较理想的模型。
　　2在脑出血后给予G-CSF治疗，小剂量应用在早期即可有效减少TNF-α及IL-6mRNA的表达，在72h这个TNF-α及IL-6mRNA表达的高峰期作用效果更为明显，在脑出血远期仍可以减少TNF-α及IL-6mRNA的表达，并具有药物浓度依赖性。

目录

声明

摘要

中英文缩略词

第一章 前言

第二章 实验材料

2．1 实验动物

2．2 实验试剂

2．3 实验仪器

第三章 方法

3．2．5 使用二次注血法脑内注射动脉血

3．2．6 行为学评分

3．3．2 RNA的逆转录

3．3．3 DNA的扩增

3．3．4 琼脂糖电泳凝胶

3．4 统计学分析

4．1 模型成功评价

4．3 术后各组在三个时间点上TNF-αmRNA表达的变化

4．4 术后3d在不同药物浓度实验组中IL-6mRNA表达的变化

4．5 术后3d在不同药物浓度实验组中TNF-αmRNA表达的变化

第五章 讨论

第六章 结论

参考文献

致谢

综述 粒细胞集落刺激因子神经保护作用研究进展