树鼩原代肝细胞分离培养条件优化

摘要

目的:通过优化树鼩原代肝细胞的分离及体外培养条件,获得能够在体外进行长期稳定培养的树鼩原代肝细胞。方法:优化肝脏灌流液、酶消化液及细胞离心速度等原代肝细胞分离条件,培养细胞密度和培养基配方等原代肝细胞培养条件,用台盼蓝染色细胞计数法、MTT检测法及EDU标记法评价所分离、培养树鼩原代肝细胞的数量、活力及生长状态。结果:添加葡萄糖的D-Hank’s液作为灌流液,含有0.005 mol/L CaCl2及12 × 104 units/L胶原酶IV的D-Hank’s液作为消化液,37℃消化15~20分钟,所获得细胞梯度离心洗涤三次,可获得最高得率及活力的原代肝细胞。在Williams’ ME基础培养基中添加生长因子(10 ng/ml),葡萄糖(0.25%)、ITS-X(1 × multiple)、1%青链霉素及2% DMSO时可以维持树鼩原代肝细胞体外稳定增殖生长达42天。结论:树鼩原代肝细胞分离与体外培养条件的优化,可大大提高细胞得率,延长细胞稳定增殖生长时间,有助于以树鼩为模型研究肝细胞生理代谢特性及嗜肝病毒感染机制。