钙滴定法测定~(99m)Tc定点标记膜联蛋白V的亲和力

摘要

目的 测定一种新型~(99m)Tc定点标记膜联蛋白V与磷脂酰丝氨酸(PS)外翻红细胞的结合亲和力.方法 通过毕赤酵母的培养和甲醇诱导表达获得带有金属螯合位点的膜联蛋白V;用超滤的方法纯化膜联蛋白V;用葡庚糖酸钠和氯化亚锡还原将~(99m)Tc定点标记于膜联蛋白V氨基末端.采用不同浓度钙离子滴定放射性膜联蛋白V结合磷脂酰丝氨酸外翻红细胞的亲和力.结果 在不同的蛋门质分子/细胞比值下测定出的半数标记蛋白结合细胞的钙离子浓度是不同的,在低蛋白质分子/细胞比值下测定~(99m) Tc-膜联蛋白V对细胞的亲和力pK=33.4.结论 毕赤酵母系统重组表达的膜联蛋白V具有较高的结合外露PS红细胞的能力.