表达HIF1αmu EPCs增强BMP2转染BMSCs成骨及成血管能力

摘要

目的 研究表达突变型低氧诱导因子1α的内皮祖细胞(EPCs)对骨形态形成蛋白2(BMP2)转染的骨髓基质细胞(BMSCs)成骨及成血管的影响.方法 密度梯度离心法分离培养兔BMSCs和EPCs并鉴定,MTT法检测不同比例BMSCs/EPCs混合培养时增殖作用,以确定混合细胞比例.实验分为6组:A组(BMSCs);B组(Adv-BMP-2BMSCs);C组(BMSCs+ EPCs);D组(Adv-BMP-2 BMSCs+EPCs);E组(BMSCs+ Adv-HIF1αu-EPCs);F组(Adv-BMP-2 BMSCs+ Adv-HIF1αmu-EPCs).以Adv-HIF1αmu和Adv-BMP2的最佳转染指数(MOI)分别转染EPCs和BMSCs.Western blot检测HIF-1α和BMP-2蛋白表达.行碱性磷酸酶活性检测;用qRT-PCR检测相关基因的表达,以评价共培养细胞成骨和成血管情况.结果 BMSCs与EPCs以1:1混合培养增殖能力优于1:2及2:1,故该实验混合细胞比例确定为1:1.Adv-BMP-2 BMSCs和BMSCs组可见BMP-2蛋白表达且表达量高于EPCs和Adv-HIF1αmu-EPCs组(P＜0.05).Adv-HIF1 αmu-EPCs组可见HIF1α蛋白表达且表达量明显高于Adv-BMP-2 BMSCs、BMSCs及EPCs组(P＜0.05).F组ALP活性以及成骨和成血管相关基因表达高于其他组(P＜0.05).结论 表达HIF1 αmu的EPCs能够增强Adv-BMP-2 BMSCs成骨和成血管潜能.