微小RNA-490-3p靶向FK506相关蛋白14表达抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭和迁移的实验研究

摘要

目的探讨微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移的影响及其机制。方法2019年9月至2020年4月,从中科院上海细胞库购买人骨肉瘤细胞株MG63进行体外培养,分为对照组(未转染)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-490-3p组(转染miR-490-3p mimics),miR-490-3p+pcDNA组(共转染miR-490-3p mimics与空载体)和miR-490-3p+FKBP14组(共转染miR-490-3p mimics与FKBP14过表达载体),采用RT-PCR检测miR-490-3p表达,Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移,蛋白质印迹法检测钙黏蛋白E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、上皮间质转化因子Twist转录因子(Twist)和FK506相关蛋白14(FKBP14)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-490-3p和FKBP14的靶向关系。结果与对照组比较,miR-490-3p组细胞中miR-490-3p表达水平明显升高(3.68±0.37比1.02±0.10,P0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实FKBP14是miR-490-3p的潜在靶基因。与miR-490-3p+pcDNA组比较,miR-490-3p+FKBP14组MG63细胞侵袭数、迁移数及MMP-2、Twist、FKBP14蛋白的表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白的表达水平明显降低(均P<0.05)。结论miR-490-3p可通过靶向抑制FKBP14表达降低骨肉瘤MG63细胞的侵袭和迁移能力,可作为骨肉瘤治疗的分子靶点。