铅对革兰氏阴性菌内毒素脂多糖介导原代小胶质细胞氧化应激反应的影响

摘要

目的:通过观察乙酸铅[lead acetate,Pb(Ac)_(2)]对革兰氏阴性菌内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导大鼠原代小胶质细胞氧化应激反应的影响,探索中枢神经系统小胶质细胞对铅与内毒素产生的反应或后果。方法:随机将培养后的小胶质细胞分为阴性对照组(Control组)、LPS组(100 ng/ml LPS)、不同浓度Pb(Ac)_(2)组1(20、50、100μM)、LPS+Pb(Ac)_(2)组[20、50、100 μM Pb(Ac)_(2)+100 ng/ml LPS]及不同浓度Pb(Ac)_(2)组2(10、20、50、100、200、500、1000、2000μM),置37℃、5%CO_(2)培养箱中孵育24h或36h,采用光学或免疫荧光显微镜观察或鉴定细胞,用MTT法检测铅作用后细胞存活率,用Griess Assay检测细胞分泌一氧化氮(nitric oxide,NO)情况、Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达水平。结果:LPS单用介导小胶质细胞24 h后,可使NO、iNOS水平上调(P<0.05);LPS与Pb(Ac)2共孵育后,NO水平下调(P<0.05),且iNOS与NO有一致性下调趋势;细胞生长状况随着铅浓度增加而出现损害现象,如细胞聚集、胞膜不完整、轮廓不清、粘合成团,核仁模糊不清;小胶质细胞存活率随Pb(Ac)_(2)浓度的增加而下降。结论:LPS可导致原代小胶质细胞发生氧化应激反应,与Pb(Ac)_(2)合用见氧化应激产物下调,似乎呈“保护”作用,但细胞形态学及细胞存活率呈现不良变化,与NO或iNOS的减少有“分离现象”。