延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究

摘要

以体外成熟培养22～24 h的延边黄牛卵母细胞作为受体,颗粒细胞为供核细胞,挤压法去核,注入供体颗粒细胞到卵黄周隙中,甘露醇融合液中施加20 μs时长的电脉冲刺激使之融合,复合化学方法激活,从融合前恢复培养时间、融合电场强度、甘露醇浓度等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜融合条件.结果表明,2.5 h处理组的融合率(70.9%)显著高于4.0 h处理组(58.2%,P0.05);融合电场强度1 100 V/cm处理组的融合率(86.4%)显著高于900 V/cm处理组(67.1%)和1 200 V/cm处理组(75.2%,P<0.05),重组胚的卵裂率(84.6%)显著高于900 V/cm处理组(69.6%,P<0.05),囊胚发育率(26.1%)显著高于900 V/cm处理组(10.0%),1 200 V/cm处理组(8.0%,P<0.05);不同浓度的甘露醇对融合率和重组胚的卵裂率没有明显的影响,但是0.28 mol/L组囊胚发育率(25.3%)显著高于0.25 mol/L组(15.3%,P<0.05).因此,适合延边黄牛体细胞克隆的融合条件为融合前恢复培养2.5 h,0.28 mol/L甘露醇作为融合液,电场强度1 100 V/cm.