基于ENO基因的猪附红细胞体病PCR-ELISA检测方法的建立

摘要

为建立猪附红细胞体病的PCR-ELISA检测方法,试验根据猪附红细胞体ENO基因序列,设计合成1对分别标记生物素(BIOT)和地高辛(DIG)的引物,进行PCR-ELISA检测.通过对包被液的种类和浓度 、结合抗体的反应条件 、封闭条件 、PCR产物的稀释度及显色时间等条件进行优化,确定阴性 、阳性判定的阈值,并进行特异性 、敏感性及重复性验证.结果表明:该方法与猪链球菌 、猪大肠杆菌 、猪肺炎支原体 、弓形虫等均无交叉反应;敏感性比常规PCR高10倍,最低检出量为1.77×106拷贝/μL;对40份猪血液样品的,阳性检出率为22.5％.该试验建立的方法具有特异 、敏感 、安全等优点,将为猪附红细胞体病的临床诊断提供更准确 、实用的检测方法.