虾夷马粪海胆谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽硫转移酶基因的克隆与表达分析

摘要

采用同源克隆方法，结合cDNA末端快速扩增（RACE）技术，从虾夷马粪海胆中克隆到谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽硫转移酶基因的全长cDNA序列，并对其基因结构进行了分析。同时用实时定量PCR方法对这2个基因在脂多糖（I。PS）刺激后不同时间的表达差异情况进行了研究。谷胱甘肽过氧化物酶基因（GPX）的cDNA全长1042bp，其中开放间读框含有657bp，编码219个氨基酸残基，无跨膜结构，无信号肽，为胞内蛋白。实时定量PCR检测发现GPX基因在LPS刺激9h时，表达量最高为对照组的4．47倍（P〈0．01），刺激32h时，表达量恢复到刺激前水平。谷胱甘肽硫转移酶基因（GST）的cDNA全长1931bp，其中开放阅读框含有684bp，编码228个氨基酸残基，无跨膜结构，无信号肽，为胞内蛋白。实时定量PCR检测发现GST基因经LPS刺激8h时表达量最高，48h后表达量恢复到刺激前水平。结果表明，谷胱甘肽过氧化物酶基因GPX、谷胱甘肽硫转移酶基因GST在虾夷马粪海胆免疫方面起到了重要的作用，为深入研究海胆免疫防御机制，改良种质和培育抗病品系，奠定了基础。