麦粒灸通过调控凋亡因子半胱氨酸家族增强环磷酰胺对Hepa1-6肝癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

摘要

目的:探讨麦粒灸对Hepa1-6肝癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及对细胞凋亡的调控机制。方法:将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、麦粒灸组、环磷酰胺(CTX)组、麦粒灸+CTX组,每组10只。将Hepa1-6肿瘤细胞接种于小鼠右侧腋后皮下建立Hepa1-6肝癌荷瘤小鼠模型。CTX组、麦粒灸+CTX组小鼠给予腹腔注射CTX 30 mg/kg,1次/d,连续3 d;麦粒灸组、麦粒灸+CTX组小鼠给予麦粒灸“大椎”及双侧“足三里”“三阴交”,每穴5壮,1次/d,连续10 d。观察荷瘤小鼠的生存状态评分和体质量变化,测量瘤体质量,计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织病理形态学变化;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;Western blot法和实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9蛋白及mRNA的表达。结果:与对照组比较,治疗结束后麦粒灸组小鼠的生存状态评分、体质量、IL-2、TNF-α含量显著升高(P<0.05,P<0.01),瘤体质量、血清IL-4含量显著下降(P<0.05);CTX组小鼠生存状态评分、体质量及瘤体质量、血清IL-2、IL-4含量显著下降(P<0.01,P<0.05),TNF-α含量显著升高(P<0.01);3个治疗组肿瘤组织中Caspase-3、Caspase-9蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。与麦粒灸组比较,CTX组生存状态评分显著下降(P<0.01),治疗结束后小鼠体质量、瘤体质量、血清IL-2含量显著下降(P<0.01,P<0.05);与CTX组比较,治疗结束后麦粒灸+CTX组小鼠生存状态评分、体质量、血清IL-2、TNF-α含量、肿瘤组织中Caspase-3、Caspase-9的蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05),瘤体质量、血清IL-4含量显著下降(P<0.05)。对照组肿瘤细胞核膜核仁清晰,分裂细胞多;麦粒灸组肿瘤细胞细胞核分裂较少,肿瘤坏死区较对照组增多;CTX组肿瘤细胞结构较模糊,坏死区较麦粒灸组增多;麦粒灸+CTX组肿瘤细胞排列松散,核分裂减少,坏死区较CTX组明显增多。结论:麦粒灸能够增强CTX的抗肿瘤作用,提高荷瘤小鼠生存质量,其机制可能与激活肿瘤组织中凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达有关。