人前列腺癌中己糖激酶-2基因对TH1/TH2细胞的影响

摘要

目的 探讨在前列腺癌PC3细胞系中高表达的己糖激酶-2基因(HK2基因)对与PC3细胞系共培养体系里的辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(TH1/TH2)的影响.方法 通过shRNA构建慢病毒感染PC3细胞系产生HK2基因敲低的PC3细胞系的实验组细胞(sh-HK2),同时使用无义序列构建慢病毒感染PC3细胞系获得阴性对照细胞(NC),qPCR与Western blot验证敲低结果.培养前列腺癌细胞(NC和sh-HK2)48 h后分离癌细胞获得上清液,提取健康人外周血单个核细胞(PBMCs).TH1空白组:PBMCs在TH1诱导条件下使用1640培养基培养48 h;TH1实验组(TH1sh-HK2组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过稳转株的上清液共培养48 h;TH1阴性对照组(TH1 NC组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过阴性对照细胞的上清液共培养48 h.TH2空白组、TH2实验组(TH2 sh-HK2组)、TH2阴性对照组(TH2 NC组)诱导条件变更为TH2诱导条件,其他不变.48 h后分光光度仪检测各共培养体系中乳酸水平.然后提取各组中PBMCs使用植物血凝素-M(PHA-M)另外培养24 h,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测TH1诱导条件下各组中PBMCs的干扰素-γ(IFN-γ)和TH2诱导条件下各组PBMCs的白介素-4(IL-4)的分泌.结果 qPCR与West-em blot显示HK2基因敲低结果显著,在TH1诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IFN-γ升高,在TH2诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IL-4降低.实验组与对照组相比乳酸含量均下降.结论 HK2基因在前列腺癌PC3中的高表达使肿瘤周围环境乳酸浓度升高,并使周围共培养体系中IFN-γ水平降低,IL-4水平升高,由此导致细胞免疫功能下降,而使针对肿瘤无效的体液免疫增强,促进肿瘤进展.