肠出血性大肠杆菌效应因子z2151的E3泛素连接酶活性鉴定

摘要

目的 利用基因工程方法原核表达z2151蛋白,并鉴定其E3泛素连接酶活性.方法 以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因,构建重组表达载体pET22b-z2151,转化BL21(DE3),诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯化获取目的蛋白;通过体外泛素化实验检测蛋白泛素连接酶活性.结果 亲和纯化得到较高浓度和纯度的z2151蛋白,其在体外泛素化反应中能够促使泛素小分子形成多聚泛素链,即有E3泛素连接酶活性;而且对E2泛素结合酶具有一定的选择特异性.结论 原核表达质粒pET22b-z2151构建成功,目的蛋白z2151具有泛素连接酶的体外泛素化能力,并且针对不同的E2酶亲和力不同,这些都为后续功能机制研究奠定了基础.