EFHD2蛋白的缺失对小鼠Sertoli细胞紧密连接蛋白的影响

摘要

目的研究EF-手域蛋白D2(EFHD2)在小鼠睾丸内的定位及表达,及EFHD2蛋白在Sertoli细胞中的缺失对紧密连接蛋白组分Occludin的影响。方法取成年小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑及睾丸组织提取总RNA和蛋白质,运用qRT-PCR和Western blot检测EFHD2在各器官组织中mRNA和蛋白质水平的差异性;运用免疫荧光和免疫组化技术,检测EFHD2在睾丸组织中的定位和表达。运用siRNA干扰技术降低Sertoli细胞中EFHD2来检测Occludin蛋白的表达。结果qRT-PCR显示EFHD2在睾丸中表达量最高;Western blot结果显示在睾丸组织中表达水平较高;间接免疫荧光和免疫组化结果显示该蛋白主要分布在Sertoli细胞内,与细胞骨架波形蛋白具有共定位,即明确该蛋白表达在Sertoli细胞。EFHD2蛋白表达降低后,Occludin蛋白表达也减少。结论EFHD2蛋白在睾丸组织中表达量相对较高,主要分布于睾丸Sertoli细胞中,与波形蛋白共定位,且能影响紧密连接蛋白Occludin的正常表达。提示EFHD2能促进和维持Sertoli细胞的细胞连接结构,为精子发生提供一个稳定的微环境。