人体c-Mpl分子配体不同表达载体的构建及其优化表达策略

摘要

利用酵母双杂交系统从人体肝脏cDNA文库筛选到血小板生成素受体Mpl分子配体的xp1基因,构建pET＿28(b)＿xp1,pBV220＿xp1和pBAD gⅢA＿xp1表达质粒,分别进行IPTG、温度和果糖诱导,表达产物利用小鼠巨核细胞集落形成单位测定活性。表达分析显示BL21 pET＿28(b)＿xp1水溶性XP1目的蛋白表达量为最高,活性最大;BL21 pBV220＿xp1被短时、低温诱导后可增加表达目的蛋白的水溶性,但稳定性差,表达量和活性均不及BL21 pET＿28(b)＿xp1高;TOP10 pBAD gⅢA＿xp1不能分泌到细胞质周膜,以包涵体形式存在细胞内中,并且为无活性表达。