假单胞菌TS1138 L-半胱氨酸脱巯基酶基因的克隆与表达

摘要

提取假单胞菌TS1138染色体基因,以自行设计的引物通过PCR方法扩增得到L-半胱氨酸脱巯基酶基因(cds),将其克隆至克隆载体pBluescript SKⅡ,并转化入大肠杆菌DH5α,测定了含有脱巯基酶基因(cds)的1．2 kb DNA片段的序列；同时,将其克隆至表达载体pETH,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,重组蛋白量占菌体总蛋白的36．8%,经Ni-NTA柱亲合层析后,重组蛋白纯化率达88%以上．用非变性PAGE方法对基因表达的脱巯基酶进行了鉴定．