微小隐孢子虫18S rRNA部分基因克隆和序列分析

摘要

分别从长春小白鼠、徐州人和南京黄牛的粪便中分离纯化了3株微小隐孢子虫(C.parvum)卵囊,根据C.parvum 18S rRNA基因序列设计合成引物,用PCR扩增卵囊基因组DNA,其大小为586bp的片段,PCR产物用试剂盒回收纯化后直接测序.将测得的序列用DNASTAR软件分析并与国外已发表的相应序列进行同源性比较,并绘制系统发育进化树.结果表明,徐州人源株与长春鼠源株及徐州人源株与南京黄牛源株同源性均为97.6%;长春鼠源株与南京黄牛源株相应序列同源性为99.6%.此3株C.parvum与国外株相应序列同源性为81.4%～100.0%.限制性内切酶酶切位点分析仅发现徐州株有1个特殊的Dde Ⅰ位点.本研究为人源及动物源微小隐孢子虫病诊断及人隐孢子虫感染来源和该病分子流行病学研究提供重要依据.