普通脱硫弧菌D—2氢化酶的提纯与性质

摘要

从全国土壤腐蚀网站长辛店分离纯化到一株氢化酶活性较高的菌株 D-2,经鉴定为普通脱硫弧菌(Desulfovibrio oulgaris)。该菌氢化酶主要位于菌体的周质空间。用 pH9.0的0.1mmol/L Tris-EDTA 缓冲液将酶洗脱,经硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素和 Sephadex G-150柱层析纯化,酶活力达到205μmolH_2·min^(-1)·mg 蛋白^(-1),得率为17.6%,纯化33.1倍。经 SDS-PAGE 和梯度-PAGE 测定,该酶为一条肽链,分子量49000道尔顿。该酶吸收光谱具有铁硫蛋白特征,ε_(400nm)和ε_(220nm)分别为34.8mM^(-1)·Cm^(-1)和120mM^(-1)cm^(-1),每个酶分子含有12个铁原子和11个硫原子。N-溴代丁二酰胺完全抑制酶活力,Hg^(2+)的抑制率也达54%,似该酶对巯基封闭性试剂具有抗性。