链霉菌高拷贝质粒pIJ101的研究：Ⅴ.两个拷贝数突变子及其与克隆片...

摘要

在分离和定位链霉菌高拷贝质粒 pIJ101上启动子活性区域的过程中,我们将 Bcll-E 片段经 MboI 进一步酶解后,克隆到由 pIJ101基本复制功能区所衍生的载体 pIJ425的 BgIII位点上,从转化变铅青链霉菌 TK64的原生质体所获得的硫链丝菌素抗性转化子中,发现了两个拷贝数极其异常的衍生质粒,命名为 pIJ2743和 pIJ2744。与 pIJ425相比,pIJ2743的拷贝数增加约10倍,而 pIJ2744的拷贝数则降低约10倍。拷贝数的剧增和剧减不是由于质粒宿主的突变,因为它们在重新转化的宿主中仍显示了突变型拷贝数特征。拷贝数的变化也不是由于载体的突变,因为切除插入片段后,载体区域再连接后的质粒仍与原始 pIJ425的拷贝数相同。将高拷贝突变子中0.63kb 的插入片段以两种不同的取向克隆到另一个类似于pIJ425的载体 pIJ486的 BamHI 位点,在一种取向插入时,新衍生的质粒仍显示出极高的拷贝数,而在另一种取向时,质粒的拷贝数不发生变化,说明拷贝数的剧增不仅只与插入片段有关,而且其功用具有明显的方向性,即为一顺式作用因子。