热带假丝酵母1230细胞色素P450基因CYPA14与CYPA16的克隆和表达

摘要

细胞色素P450(CYP)是一种单加氧酶,在热带假丝酵母(Candida tropicalis)ω-氧化过程中发挥关键作用.通过对来源不同的P450基因进行同源性分析,首先克隆到热带假丝酵母1230中P450基因的部分序列,再利用基因组步行法克隆其未知序列,结果分别获得了两个P450同工酶基因CYPA14和CYPA16的完整序列.经PCR方法证实,二者在染色体上的位置相邻,其读码框分别编码522和540个氨基酸残基的肽链.经NCBI BLAST搜索比较后发现,二者与热带假丝酵母ATCC 20336中的P450成员CYP52A14和CYP52A16分别编码的序列几乎完全一致,与热带假丝酵母ATCC 750中的P450成员CYP52A2和CYP52A1也具有较高的相似性.同时,对经诱变后的几株二元酸生产菌株的CYPA14与CYPA16也进行了克隆和序列比较,发现部分序列中的个别氨基酸残基发生了突变.CYPA14和CYPA16均在酿酒酵母中获得了有效表达,其中CYPA16的P450表达含量高于CYPA14,后者有部分表达产物发生了变性.