牛分枝杆菌MPB51基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB51成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约800bp的DNA片段.通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆质粒pGEM-T-51.以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-51和pET28a(+),并将纯化的MPB51基因亚克隆至pET28a (+)中,构建出原核表达质粒pET28a-51.将pET28a-51转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约30kD外源蛋白带.Western blot分析发现,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB51的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础.