C-末端残基Arg缺失的D-海因酶的分子形式与稳定性

摘要

报道D-海因酶分子C-末端 Arg残基的缺失,导致酶的解聚与稳定性的显著改变.用基因克隆、表达与纯化的方法,制备了重组D-海因酶(P479)及其C-末端残基Arg缺失的D-海因酶(P478).SDS-PAGE和Native-PAGE分析表明,在完全相同的条件下,两者单体的分子量相同;但天然P479为二聚体,而P478为单体并保持约40%催化底物海因的活性.突变酶P478的pH值稳定性显著增加,抗SDS能力亦有所提高,但热稳定性明显降低.结果预示:D-海因酶的C-末端残基Arg显著影响酶的分子形式及热稳定性,虽也影响酶活性,但非酶活性所必需.