极端嗜盐古菌质粒pSCM201衍生穿梭表达载体的构建及应用

摘要

[目的]利用有自主知识产权的嗜盐古菌θ型复制质粒和启动子,构建在极端嗜盐古菌模式菌株西班牙盐盒菌(Haloarcula hispanica)中方便使用、功能完善的基因表达载体.[方法]以pSCM201的最小复制子为基础,通过引入莫维诺林抗性基因,大肠杆菌质粒复制子以及氨苄抗性基因,构建了一个新的嗜盐古菌-大肠杆菌穿梭载体.利用定点突变和末端补平法依次将其中多余的酶切位点去除后,再添加hsp5启动子核心序列、人工合成的多克隆位点以及蛋白纯化标签His·Tag等重要元件成功构建了嗜盐古菌表达载体pSCM307.将报告基因bgaH插入到该载体的多克隆位点中并转化H.hispanica.AS2049,通过X-gal平板筛选和β-半乳糖苷酶酶活实验检测pSCM307的表达能力.[结果]pSCM307具有独立的自主复制能力,其多克隆位点方便实用,报告基因bgaH在hsp5启动子控制下实现了高效表达.[结论]成功构建了嗜盐古菌领域中第一个方便使用的基因表达载体.