ARISA方法研究产甲烷菌共存及去除条件下瘤胃真菌多样性变化

摘要

[目的]建立厌氧真菌多样性分析方法,并研究厌氧真菌与产甲烷菌共培养液在传代过程中厌氧真菌的区系变化及共培养液中去除产甲烷菌条件下厌氧真菌多样性的变化.[方法]根据厌氧真菌ITS1序列长度多态性,设计厌氧真菌特异性引物,然后PCR扩增样品中厌氧真菌ITS1序列,在基因分析仪中分析PCR产物序列长度多态性,分析共培养液在传代过程中及共培养液中去除产甲烷菌后厌氧真菌多样性的变化.[结果]对瘤胃厌氧真菌Caecomyces属YC301菌株、Neocallimastix属菌株(YC501与YC502)的ARISA分析结果显示:菌株YC301得到一个长度为389.67 bp的片段;YC501得到4个长度分别为415.91、425.69、437.31和438.46 bp的片段;YC502所得片段与YC501相似.ARISA分析来自瘤胃内容物的厌氧真菌与产甲烷菌共培养液中厌氧真菌多样性显示:共培养液在体外传代培养过程中,厌氧真菌多样性降低,ARISA扩增片段长度为354～375及425～438 bp的厌氧真菌在体外传代中消失,片段长度为383、389～391及413～418 bp的厌氧真菌是体外共培养液中的优势菌,在传代过程中稳定存在.对厌氧真菌与产甲烷菌共培养液及去除产甲烷菌的真菌培养液研究表明:产甲烷菌影响培养液中真菌的种类,当产甲烷菌存在时,共培养液中主要是片段长度为383.51、391.44和413.55 bp的厌氧真菌;而添加氯霉素去除甲烷菌后,培养液中主要是片段长度为415.80、425.66、437.46和438.47 bp的厌氧真菌.[结论]本文建立了快速可行的厌氧真菌多样性分析方法.ARISA分析表明厌氧真菌与产甲烷菌共培养液在传代过程中真菌多样性降低,共培养液传代4次后,厌氧真菌菌群趋于稳定.去除产甲烷菌后,共培养液中厌氧真菌的菌群结构发生改变.