c-di-GMP抑制转录调控因子Clpxoo与葡聚糖酶基因启动子的结合

摘要

[目的]阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体和转录调控因子Clpxoo对葡聚糖酶基因(engAxoo)的转录调控作用机制.[方法]通过基因表达载体的构建和转化、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了clpxoo基因的原核表达和产物纯化.通过荧光素(FAM)探针标记和凝胶阻滞试验(EMSA)对Clpxoo纯化蛋白与葡聚糖酶基因启动子(engAxoo-p)的结合活性及其c-di-GMP信号分子的抑制作用进行了测定分析.[结果]在优化的诱导表达和纯化条件下,成功地获得了Clpxoo纯化蛋白.Clpxoo可与engAxoo-p序列发生阻滞现象,表明它具有与启动子特异性结合的活性.在反应体系中加入c-di-GMP可导致结合作用的消除.[结论]Clpxoo接受c-di-GMP信号后,可能通过构象的改变,从而与engAxoo-p的结合活性受到抑制；优化的Clpxoo蛋白纯化和EMSA方法可以用于后续的调控元大规模鉴定的研究.