基于T7启动子表达系统的牛副流感病毒3型微型基因组的构建与拯救

摘要

[目的]通过负链RNA病毒反向遗传学操作,构建并拯救以T7启动子表达系统为基础的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)微型基因组.[方法]分别构建表达该病毒NP、P和L蛋白的辅助质粒px8δT-PTl-bPIV3-NP、px8δT-PTl-bPIV3-P和px8δT-PT1-bPIV3-L以及含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)开放读码框(Open reading frame,ORF)、BPIV3前导序列(Leaderregion)、转录起始信号(Gene start signal,GS)、转录终止信号(Gene end signal,GE)和尾随序列(Trailer region)等顺式作用元件(Cis-acting elements)的微型基因组质粒pSC11-bPIV3-EGFP,鉴定正确后,采用2种不同方法拯救BPIV3微型基因组,并通过观察荧光表达情况判断是否拯救成功.[结果]成功构建了基于T7启动子表达系统的BPIV3微型基因组,并实现了拯救.[结论]该系统的成功构建,有助于今后对BPIV3开展基因修饰研究.