Chk1抑制剂逆转TP53突变型乳腺癌细胞的顺铂耐药

摘要

目的 研究细胞周期检查点激酶1抑制剂(cell cycle checkpoint kinase 1 inhibitor,Chk1 i)AZD7762对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的作用,以及AZD7762逆转TNBC细胞对顺铂的耐药性及其机制.方法 将AZD7762孵育BT-549、HCC70、MDA-MB-231、T47D和MCF-7细胞,利用CCK8法检测细胞存活率.构建MCF-7-shp53细胞系,利用CCK8和集落形成实验检测细胞MCF-7-shp53与野生型细胞的增殖能力,利用流式细胞术与膜联蛋白-Ⅴ染色法检测两组细胞凋亡与细胞周期情况.将AZD7762和顺铂加入两组细胞联合孵育72 h,利用Chou-Talalay方程计算两种化合物的协同效应,并利用免疫印迹法检测相关蛋白表达.结果 通过评估AZD7762对5种TNBC细胞活力的影响,发现MCF-7是最具AZD7762耐药性的细胞系.TNBC对AZD7762的敏感性依赖于TP53状态.探讨AZD7762对TNBC细胞毒性作用的潜在机制:AZD7762终止TP53突变细胞S期和G2/M期阻滞,通过促进DNA损伤和凋亡导致细胞死亡.AZD7762联合顺铂作用可以逆转TP53突变型乳腺癌细胞对顺铂的耐药性,并可诱导TP53突变型乳腺癌细胞有丝分裂改变.结论 AZD7762通过促进DNA损伤、凋亡、终止G2/M期阻滞和诱导有丝分裂改变而导致细胞死亡.对AZD7762的敏感性取决于TNBC细胞中的TP53状态.此外,AZD7762逆转TNBC细胞对顺铂的耐药性,Chk1 i是治疗TNBC患者的潜在药物.