脱氧核酶对鼻咽癌细胞端粒酶活性的抑制作用

摘要

目的探讨脱氧核酶对端粒酶RNA组分的切割作用及对鼻咽癌端粒酶活性的抑制作用.方法针对端粒酶RNA组分(hTR)的核苷酸序列,合成"10～23"型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割hTR mRNA;转染鼻咽癌细胞后,用RT-PCR扩增hTR基因片段,用PCR-ELISA法测定端粒酶活性.结果未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3′末端添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割hTR mRNA;在转染鼻咽癌细胞后,DzTi比DzT对hTR mRNA表现出更强的切割作用,DzTi能够显著地降低鼻咽癌细胞端粒酶活性(P<0.01);但DzTi和DzT转染对鼻咽癌细胞的生长均没有明显的影响(P>0.05).DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT'和DzTi'在胞外和胞内均不表现对hTR mRNA的切割作用.结论人工合成的脱氧核酶能够高效特异地切割端粒酶RNA组分,并降低鼻咽癌细胞的端粒酶活性.作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中将具有极其重要的应用价值.