细菌体内同源重组构建pAdEasy-1-hNGFβ重组体

摘要

目的采用细菌内同源重组法高效制备含神经生长因子β基因(hNGFβ)的重组腺病毒质粒.方法 hNGFβ自载体pBLAST44-hNGFβv02中切出,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)-hNGFβ,自pBluescriptⅡsk(+)-hNGFβ中酶切出hNGFβ DNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-hNGFβ,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAdEasy-1-hNGFβ.结果线性化的pShuttle-CMV-hNGFβ转化含pAdEasy-1的高效感受态大肠杆菌BJ5183,24 h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得大于20 kb的大片段和4.5 kb的特征性条带,PCR反应扩增出731 bp片段.结论应用细菌内同源重组能快速构建含hNGFβ基因的重组腺病毒载体pAdEasy-1-hNGFβ,为hNGFβ基因的研究及应用奠定了基础.