腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对冠状动脉再狭窄的预防作用

摘要

目的 应用重组腺病毒载体介导的肝细胞生长因子(HGF)基因转染血管内皮细胞(VEC)及血管平滑肌细胞(VSMC),探讨HGF基因对其凋亡的诱导作用.方法 以肝细胞中抽提的总RNA为模板,反转录cDNA,采用RT-PCR技术获得HGF基因,并引入酶切位点,转染大肠埃希菌,筛选阳性菌落,经酶切及测序证实后,转染腺病毒,制造病毒包涵体,经3轮扩増,制备高效表达HGF基因腺病毒载体(Ad-HGF).以此感染VEC及VSMC,设为Ad-HGF组;再以人工合成HGF培养VEC及VSMC为阳性对照组(HGF组);以未感染Ad-HGF的细胞为阴性对照(对照组).并采用流式细胞仪检测缺氧情况下各组细胞的凋亡率.结果 VEC的Ad-HGF、HGF组细胞凋亡率均低于对照组,差异均有极显著性意义(均P＜0.01), 但VSMC的3组细胞凋亡率差异无显著性意义(P＞0.05).结论 腺病毒载体介导HGF基因感染VEC后能在缺氧情况下有效地阻止VEC发生凋亡,但不能有效抑制VSMC凋亡, 提示对冠状动脉再狭窄有预防作用.