两种复合阳离子聚合物/pDNA的基因活化基质转染骨髓间充质干细胞的效果比较

摘要

目的 比较2种复合阳离子聚合物/pDNA的基因活化基质转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的效果.方法 以壳聚糖/胶原复合支架为基质材料,以壳聚糖/pDNA复合物或PEI/pDNA复合物为基因传递系统,合成了2种不同的基因活化基质(gene-activated matrix,GAM).以含有裸DNA的GAM作为对照,将BMSCs种植于各组GAM中共培养7d,采用MTT法通过检测细胞的吸光度值测定细胞的增殖能力,检测各种GAM的细胞相容性;各组GAM采用共培养转染和直接转染2种方式体外转染BMSCs,通过检测萤光素酶表达水平比较各种GAM体外转染BM-SCs的能力.结果 与对照组相比,含有壳聚糖/pDNA复合物的GAM并未影响BMSCs的增殖(P＞0.05),具有良好的细胞相容性;而与含有PEI/pDNA复合物的GAM共培养的BMSCs增殖能力明显低于对照组(P＜0.05),对BMSCs具有一定的细胞毒性.采用共培养转染方式,壳聚糖/pDNA与PEI/pDNA复合物组均获得比对照组高的转染结果(1.28×10 5,1.62×105 vs.2.14×104 RLU/mg protein),但两复合物组相比差异无统计学意义(P＞0.05);采用直接转染方式,壳聚糖/pDNA组的萤光素酶表达水平与对照组相比差异无统计学意义(4.51×104vs.3.23× 104 RLU/mg protein,P＞0.05),而PEI/pDNA组的表达水平(2.50×105 RLU/mg protein)高于对照组(P＜0.05).结论 含有壳聚糖/pDNA复合物的GAM,体外共培养转染BMSCs具有较好的生物相容性及一定的转染能力,具有用于体内基因治疗的潜力.