YlyA和RNA聚合酶的反应性鉴定

摘要

目的:用亲和层析法鉴定YlyA与RNA聚合酶(RNAP)的结合性能.方法:将YlyA分别上样于以Affi-gel 15为亲和介质制备的空白柱、牛血清白蛋白(BSA)柱和RNAP柱;以GreA和绿色荧光蛋白(GFP)为阳性和阴性对照蛋白分别上样于同一RNAP柱,洗涤和洗脱缓冲液(pH均为7.9)的盐离子浓度分别为30 mmol/L和400 mmol/L;用免疫印迹法对洗涤和洗脱流出液中的YlyA进行检测.结果:在空白柱和BSA柱的洗脱收集液中,没有检测到YlyA,大量的YlyA出现在了洗涤收集液中;而在RNAP柱的洗脱收集液中,检测到了YlyA和GreA,没有检测到GFP.结论:YlyA与RNAP之间具有特异性结合能力,为YlyA极有可能是一种转录因子的生物信息学分析结果提供了实验证据.