慢病毒载体介导HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞的影响

摘要

目的 观察在体外培养条件下,慢病毒载体介导的HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞生物学特性的影响及基因的表达情况.方法 利用本室分离鉴定保存的树鼩BM-MSCs,构建含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体,并分别将CD81和OCLN基因转染到BM-MSCs中,荧光倒置显微镜和流式细胞仪检测转染效率,CCK8法检测转染后BM-MSCs的细胞增殖情况,成骨成脂细胞诱导分化检测其多向分化潜能.采用实时荧光定量及WB方法检测HCV受体(OCLN/CD81)基因mRNA和蛋白表达情况和转染后BM-MSCs干性基因的表达.结果 以MOI为100转染含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体后,LV-CD81转染效率达99.4％,LV-OCLN转染效率22.6％.细胞增殖趋势与未转染基因的BM-MSCs相似,转染后的BM-MSCs仍可以向成骨成脂细胞分化,但能力有所下降.干性基因NANOG mRNA表达增高,差异有显著性(P<0.05),LIN28A mRNA表达下降,差异有显著性(P<0.05).转染后树鼩BM-MSCs能高效表达所转入的外源基因.结论 构建的含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体可以成功转染树鼩BM-MSCs,并高效表达所转入的基因,转染后对树鼩BM-MSCs的多向分化潜能有一定的影响.