WSSV和IHHNV二重实时荧光PCR检测方法的建立

摘要

根据基因库中对虾白斑综合症病毒WSSV(A.F369029)和传染件皮下及造血器官坏死病毒IHHNV(AF218226)基因序列,设计了WSSV和IHHNV的两对特异性引物和两条用不同荧光基团标记的TaqMan探针.对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测WSSV和IHHNV的二重实时荧光PCR方法.该方法特异性好,对WSSV和IHHNV的检测敏感件分别达到2和20个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对WSSV和IHHNV不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这二个病毒.对保存的30份经常规PCR检测仪为WSSV或IHHNV阳性的样品进行二重实时荧光PCR检测,结果都为阳性,其中1份为WSSV和IHHNV混合感染.本研究建立的二重实时荧光PCR方法用于WSSV和IHHNv的检测具有特异、敏感、快速、定量等优点.