斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白基因PGRP-LC1的克隆及功能分析

摘要

天生免疫系统是昆虫抵御外界病原入侵的主要方式.目前研究发现,Imd信号通路与按蚊感染柏氏疟原虫Plasmodium berghei的强度密切相关,而PGRP-LC1是Imd信号通路最上游的受体之一.为了研究斯氏按蚊Anopheles stephensi肽聚糖识别蛋白PGRP-LC1,采用RT-PCR并结合RACE技术克隆斯氏按蚊PGRP-LC1基因,通过序列比较分析,得到两条eDNA序列,其开放阅读框分别为1 365 bp和1 290 bp,3'非编码区为320 bp,5'非编码区为240 bp.将两条eDNA分别命名为AsPGRP-LC1a(GenBank注册号GU214232)和AsPGRP-LC1b(GenBank注册号GU214233).AsPGRP-LC1a编码454个氨基酸,分子量约为49.07 kDa;AsPGRP-LC1b编码429个氨基酸,分子量约为46.3 kDa.AsPGRP-LC1b比AsPGRP-LC1a少一个长度为75 bp的外显子,该外显子在冈比亚按蚊Anopheles gambiae PGRP-LC1基因的某些可变剪切形式中也有发现.分别将两个斯氏按蚊PGRP-LC基因在冈比亚按蚊细胞系L3-5和斯氏按蚊细胞系MSQ43中过量表达,通过双荧光素酶检测系统检测抗菌肽的表达情况,结果显示克隆得到的PGRP-LC1基因在两种细胞系中均能够启动Imd信号通路,为进一步研究斯氏按蚊的Imd信号通路提供了依据.