沙吸附DNA的分布及转化活性

摘要

尽管自然环境中存在着大量的DNase,大分子体外DNA在土等生态环境中存在并保持转化活性.实验表明DNA被沙土吸附之后会被沙土保护而产生对DNase的抗性.然而对沙中DNA的检测多是通过PCR或者探针杂交的方法来进行,采用转化方法进行来检测的却鲜有报道.为了研究DNA释放进沙之后的分布及转化活性,建立了流过式微型离心沙柱.将20μL pUC18置于1.0g直径介于1.2～2.5mm之间的沙中,1.5mL 0.1mol/L CaCl2洗脱之后再用200μL TEN缓冲液提取.结果表明吸附于沙中的DNA经提取后仍然具有生物转化活性,并且与洗脱液、提取液具有不同的转化活性和对DNaseⅠ抗性,说明DNA与沙粒的结合不只是一种简单的附着,而是3种复杂的复合体结构.相对于没有沙保护而只能在室温下保留7d转化活性的DNA,在被沙吸附保护之后的DNA可以保存转化活性达35d以上.研究结果还表明在存在感受态细胞的情况下,生物释放出来的DNA并非直接与沙粒结合,而是优先与感受态细胞结合.推测认为沙吸附DNA的转化活性同DNA的构象及同感受态细胞接触的机会相关,而与DNA的浓度不直接相关.这些结果为研究环境中存在的DNA库及其与混居的微生物间的相互作用,水平基因转移及其生态效应提供了有价值的信息.