马铃薯多酚氧化酶基因克隆及反义表达载体构建

摘要

从甘农薯1号马铃薯试管苗叶片中提取总DNA,根据Genebank报道的马铃薯多酚氧化酶基因(POT32)序列,设计合成了带有BamHⅠ、SacⅠ特定酶切位点的2对特异引物,通过PCR获得1 840 bP和476 bP的扩增产物.测序结果表明,1 840 bp的扩增产物与Genebank中发表的序列一致,476 bp的扩增产物正是欲扩增的马铃薯多酚氧化酶基因的同源片段.将2个扩增产物反向连接到表达载体PC3中,通过双酶切鉴定后,按直接导入法实现反义基因表达载体质粒向农杆菌EHA105的导入;并经PCR鉴定证明,此质粒已整合到农杆菌Ti上.