马铃薯无机焦磷酸酶基因cDNA克隆及其反义植物表达载体构建

摘要

以马铃薯栽培品种大西洋(Atlantic)试管苗叶片为材料,用Trizol试剂提取总RNA,通过RT-PCR方法获得马铃薯PPase基因的cDNA片段,将该片段反向连接到克隆载体pBluescriptSK+,酶切鉴定后进行基因测序,所得PPase基因片断为673bp,编码211个氨基酸,与已克隆的PPase基因同源性达到97.62%。将该PPase基因反向插入到表达载体pBI121、pBIC和pBIrd中,分别构建了组成型启动子CaMV35S、块茎特异表达启动子CIPP和低温诱导表达启动子rd29A驱动的反义PPase基因植物表达载体,以期利用转基因技术培育出块茎休眠期延长或缩短的马铃薯新种质。